Энтеробактериялар мен кейбір вибриондарды дифференциалды анықтауда Фогес-Проскауэр реакциясы ерекше орын алады. Сынақ бактериялардың ацетоин түзу үшін глюкозаны ашыту қабілетіне негізделген.
Зерттеу процесінің мәні
Микробиологияда Voges-Proskauer реакциясы жиі энтеробактериялардың (соның ішінде псевдотуберкулез және энтероколит қоздырғыштары), ішек таяқшасы және спора түзетін аэробтардың Yersinia тұқымдасын саралау үшін қолданылады. Нәтиже белгілі бір реагенттер қосылған кезде ортаны бояу арқылы көрінеді.
Бұл сынақ IMViC сериясына жатады (Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate аббревиатурасы) – дифференциалды анықтамаларды қамтитын идентификациялық сынақтар тобы:
- индолмен, триптофанның индолға ыдырауына негізделген, Ковац немесе Эрлих реагентінің қатысуымен қолданылады;
- пайдаланудаглюкоза метаболизденуі нәтижесінде берілген рН анықтайтын метилрот немесе метил қызыл;
- Ацетил-метилкарбинолды анықтауға арналған Voges-Proskauer реакциялары;
- ортаның сілтіленуі нәтижесінде түсі өзгеретін цитратты пайдалану.
Процестің мәні диагностикаланған бактериялардың оттегінің қатысуымен олар түзетін ацетоиннің каустикалық калиймен әрекеттесуі нәтижесінде олардың болуын визуализациялау болып табылады. Ацетил-метилкарбинол диацетилге дейін тотығады, ол ашық қызыл немесе қызғылт қосылыс түзеді. Каустикалық калий қоспас бұрын альфа-нафтолды енгізу арқылы сынақтың сезімталдығын арттырыңыз.
Сынақ параметрі
Фогес-Проскауэр реакциясының тұжырымы микроорганизмдерді алдын ала өсіруді қамтиды. Таза дақыл Кларктың дифференциалды диагностикалық ортасына себіледі, оның вариациясы Кларктың сорпасы (агар-агар қоспай). Не дайын орта пайдаланылады, не дербес дайындалады. Ингредиенттер мыналарды қамтиды:
- 5г пептон;
- 5г глюкоза;
- 5г екі негізді калий фосфаты;
- 1л дистиллят.
Зерттеу кезінде культура стерильді бактериологиялық ілмекпен сұйық ортаға егіледі. Саны - 5 мл пробиркадағы плюс бақылау. Инкубация екі күн бойы 35-37 градус температурада жүргізіледі. Әрі қарай, Фогес-Проскауэр реакциясын зерттеу кезең-кезеңімен жүргізіледі:
- 2, 5 мл сорпа культурасы стерильді түтікке ауыстырылады.
- Алты тамшы альфа-нафтол (5% спирт ерітіндісі) қосыңыз.
- 40% қосу0,1 мл мөлшеріндегі күйдіргіш калий ерітіндісі немесе екі тамшы.
- Араластыру пробирканы ақырын шайқау арқылы жүзеге асырылады.
- Тәжірибе басталғаннан кейін 15 минуттан кейін нәтижені бағалаңыз.
Баламалы сынақ әдісі түнгі инкубация болып табылады, оның уақыты 18 сағатқа дейін немесе бір тәулікке дейін қысқарады. Бұл әдіске қосымша экспресс-сынама да қолданылады: культураны ілмекпен 2 мл ортаға енгізеді, шамамен төрт сағат инкубациялайды, содан кейін реагенттерді 2-3 тамшыдан бірдей мөлшерде қосады, араластырады және нәтиже он минуттан кейін бағаланады.
Бақылау құралы Klebsiella pneumoniae пневмониясының қоздырғыштарының бірі - atcc 13883 штаммы.
Нәтижені бағалау
Реагенттерді қосқаннан кейін қажетті уақыттан кейін (5-тен 15 минутқа дейін) айқын оң реакциямен шие-қызыл түс, қызыл және қызғылт - әлсіз оң реакциямен байқалуы керек. Ешбір өзгеріс теріс нәтиже ретінде жазылмайды.
Ерітіндідегі каустикалық калийдің артық болуы оң реакцияға еліктеп, мыс түсіне боялуы мүмкін. Бұл жағдайда сыналған колонияның теріс жауабы жазылуы керек. Сондай-ақ, бағалау реагенттер енгізілгеннен кейін бір сағаттан кейін берілген жағдайларда мыс бояуы пайда болады.
Нәтижені бағалау кезінде зерттелетін микроорганизмдерді ұзақ өсіру (үш күннен астам) ортаның қышқылдануына әкелетінін, бұл зерттеудің дұрыс емес нәтижесіне әкелетінін ескеру қажет. Реакция шамалы оң немесе болуы мүмкінжалған теріс.
Сынақ реагенттеріне қойылатын талаптар
Voges-Proskauer реагенттері дұрыс концентрация, жоғары тазалық және тұрақтылық сияқты талаптарға сай болуы керек, бұл дұрыс сақтау арқылы жүзеге асырылады.
Қолдануға дайын сынақ жинақтары әдетте 100 немесе одан да көп қолдануға арналған реагенттерді қамтиды және пластиктен немесе тоналды шыны флакондарда келеді. Сапа тиісті құжаттамамен реттеледі.
